杭州3K超滤离心管使用方法

杭州3K超滤离心管的使用步骤如下：

预处理：新购的超滤离心管使用前需要用纯水浸泡并置于冰箱预冷10分钟。之后倒出纯水，将超滤管置于冰上预冷2-5分钟。

加样：如超滤管中有少许残留水，可将超滤管内管倒置1000×g离心1分钟，移液枪移取适量样本加入超滤管中。

平衡：质量和重心二者都要达到平衡。注意转速和加速度不可太快，否则直接损坏超滤膜。开始离心超滤（离心机预冷至4度）。不同离心机的转速 rpm换算成g之后，有所不同。具体可阅说明书。离心机的加速度调至最低档，减小对膜的压力。

离心：配平后，以12000 ×g离心（15-30分钟），等达到目的转速后方可离开。使用完的超滤管用纯水反复清洗5次，再用75%乙醇冲洗3次。

注意事项：

超滤管最大离心力不能超过12000g，否则会导致滤膜破损。

超滤样本会损失五分之一至二分之一的样本量，主要取决于样本中蛋白含量。

若管底有可见的蛋白沉淀，可以先加入纯水，然后用枪头吹打，注意不要碰到膜，吹打至沉淀悬起，然后倒掉，不可用自来水猛冲。

这些是基本的使用步骤，但具体的使用可能还需要杭州3K超滤离心管的产品说明书，或者寻求专业人士的帮助。

使用步骤如下：

选择合适的超滤管，主要考虑MWCO和浓度体积。通常，分子量应不大于靶蛋白分子量的1/3。

新购买的超滤管是干燥的，使用前添加MilliQ水，水量完全通过膜，并在冰浴或冰箱中预冷几分钟，然后倒出水以添加蛋白质溶液。蛋白质溶液的量不得超过试管顶部的白线，在添加蛋白质溶液之前，需要将超滤管插入冰中进行预冷却。

进行平衡操作。注意速度和加速度不能太快，否则会直接损坏超滤膜。开始离心超滤（将离心机预冷至4度）。膜片和旋转轴的方向可根据说明进行调整（在角离心机的情况下，膜片垂直于轴）。在实际使用中，一般速度低于说明书中的规定，可能会延长离心管的使用寿命。

浓缩至剩余的1ml时，取50ul的家用Bradford溶液，加入10ul的流过液，看它是否变成蓝色，并确定超滤管是否泄漏了蛋白质。如果管泄漏，则倒入上层，然后流回新管中以开始超滤。要准确确定试管是否泄漏，请以5mg / ml BSA离心10min，然后将其通过，运行蛋白凝胶或Bradford粗测量]，继续添加剩余的蛋白质溶液以浓缩（在冰上操作以防止蛋白质加热），直到所有浓缩溶液都加入为止。在离心过程中，要注意是否发生蛋白质沉淀并引起试管阻塞。如果发生沉淀，请确定沉淀的具体原因，蛋白质浓度是否过高或缓冲液是否不合适；前者可以通过同时使用多个超滤管来解决，以降低浓度，后者可以改变不同的缓冲液，直到蛋白质沉淀为止。

更换缓冲液：在将总蛋白溶液浓缩至约1ml时，轻轻地添加新的缓冲液（通过0.22um超滤膜进行超滤），然后连续浓缩至约1ml，持续三倍，以最终浓度取决于所需的蛋白质浓度，通常不大于500ul，也可以浓缩至小于200ul。根据每次至少10次的体积浓度，是三次的1000倍以上，基本上可以达到更换缓冲液的目的。

取出最终的蛋白质浓缩物。在冰上操作。使用黄色的移液器吸头（200ul），沿边缘轻轻插入移液器吸头，然后轻轻吹动并混合蛋白质溶液。注意不要触摸超滤膜。每次吸取浓缩溶液至200ul，直到吸完为止。不必抽出试管底部的最后浓缩溶液，否则太难了，可能会损坏超滤膜。最后，在不通过超滤膜的情况下，将MilliQ水添加到超滤管中，以防止滤膜失水和干燥。

处理超滤管和重新使用超滤管的步骤：将水倒入超滤管中，并用MilliQ水轻轻冲洗几次。如果试管底部有明显的蛋白质沉淀，则可以先加水，然后用移液管将其吹净。注意不要触摸膜。沉积物垂下然后流失，你不能用自来水来冲加入0.2M NaOH溶液后，将其在室温放置20分钟，在此期间使超滤管平衡。再离心10分钟。倒出剩余的NaOH溶液，将棉芯浸入烧杯（1或2L）的MilliQ水中，放置数小时，然后用新水代替，放置数小时以连续稀释NaOH的浓度。用自来水洗涤50ml试管和盖子，并用MilliQ水洗涤内壁。

取出浸没的试管芯，将其加入到满满的MilliQ水中，然后用MilliQ水填充50ml试管。慢慢地将管芯放入50ml。

以上步骤仅供参考，具体操作请根据实际情况调整。